In order to get a clear insulin solution for the assay, stock solution of insulin were prepared in 0.5M Tris-HCl, pH7.0, without EDTA, by supsending 50mg of insulin in 2.5mL of buffer and adjusting pH to about 3 with 1M HCl to dissolve the insulin completely. Then the solution was back titrated to pH 7.0 with 1M NaOH, and the final volume was adjusted to 5ml. The clear solution was then can be used for assay or kept frozen at –20℃.
在我的实验中，称取胰岛素（Insulin from bovin pancreas,Sigma.）8.7mg，先加入180μl 1M Tris-HCl(pH7.0，不含EDTA)， 然后慢慢滴入约40μl 1M 的HCl（每4μl地加），可使胰岛素完全溶解至澄清。再慢慢滴加0.5 M 的NaOH 调节pH。实际上，pH 很难严格调回到Protocol所说的7.0，pH 在3左右的时候胰岛素就会重新析出，这时又得用HCl 重新溶解。
注：在第一次滴加HCl 时切忌过量，否则溶液会持续呈现半透明的乳浊液状态（这种现象跟insulin没有溶解的悬浊液状态是不一样的）。如果遇到这种情况，慢慢滴加 0.5 M 的NaOH（约22μl）即可得到澄清溶液。得到澄清溶液之后，最好静置一会，观察澄清的胰岛素溶液是否会重新呈现乳浊液状态。
实验证明，用0.1M HCl和0.1M NaOH 调节胰岛素的溶解效果会更好。在Tris-HCl缓冲溶液中，切勿加入EDTA，否则会形成hexameric zinc insulin.
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原载于 散人笔记
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